免疫組化（IHC）技術 點擊次數:6234 【打印此頁】 【返回】 免疫組織（細胞）化學是應用抗原和抗體特異性結合的免疫學原理及組織化學顯色原理相結合的實驗技術。因為抗體與抗原之間的結合具有高度的特異性，所以先將組織或細胞中的某種化學物質提取岀來，以此作為 抗原或半抗原，通過免疫后獲得特異性抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的相應抗原物質，反之亦然。而抗體與抗原結合后形成的免疫復合物是無色的，因此須借助于組織化學的顯色方法將抗原抗體反應的部位顯示出來，從而達到對組織切片標本中的某些化學成分進行原位的定性、定位或定量的研究。組織中凡是能作抗原或半抗原的物質，如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進行檢測。 本公司采用SP法免疫組化染色方法，具體步驟如下： 1.石蠟切片烘箱烤片、脫蠟和水化后，用PBS＜pH7.4＞沖洗3次，每次3min。并對組織進行抗原修復（枸椽酸鹽緩沖液＜pH6.0＞、微波高火5min、兩次，第二次修復前需冷卻至室溫）。 2.每張切片滴加過氧化酶阻斷溶液，室溫下孵育10min以阻斷內源性過氧化物酶的活性。用PBS沖洗3次，每次 3min。 3.除去PBS液，每張切片滴加正常非免疫動物血清，室溫下孵育10min。 4.除去血清，每張切片滴加第一抗體，室溫下孵育60min或4℃過夜。PBS沖洗3次，每次3min。 5.除去PBS液，每張切片滴加生物素標記的第二抗體，室溫下孵育1Omin后，用PBS沖洗3次，每次3分鐘。 6.除去PBS液，每張切片滴加鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液，室溫下孵育10min后，用PBS沖洗3次，每 次 3min。 7.除去PBS液，每張切片滴加新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察3-10min。 8.自來水沖洗，蘇木素復染，自來水沖洗返藍，經梯度酒精脫水干燥、二甲苯透明后，中性樹膠封固。 該方法敏感度更高、背景更清晰，特別適用于檢測福爾馬林固定石蠟包埋組織中低含量的抗原。